发光卜萝的实验原理与制作指南

一、实验背景

发光卜萝（Luminescent Broccoli）是一种通过基因编辑技术培育的荧光蔬菜，其原理基于荧光蛋白基因导入与表达调控。

二、实验原理

1. 荧光蛋白基因作用机制

• 绿色荧光蛋白（GFP）：由水母基因改造而来，可在蓝光激发下发出548nm绿色荧光
• 红荧光蛋白（RFP）：由平菇基因改造，激发波长为563nm

2. 发光强度影响因素

变量	最佳条件	强度范围
光照周期	14小时光照/10小时黑暗	荧光强度提升40%
培养温度	22±2℃	与25℃相比减少15%亮度

三、实验材料

• 主要试剂：pGlo-GFP质粒、农杆菌EHA105、MS培养基
• 仪器设备：恒温水浴锅、荧光显微镜（40×物镜）
• 文献参考：《化学实验基础》（王某某，2021）

四、实验步骤

1. 步骤一：植物组织培养：将菜心茎段浸泡于50mg/L AgNO₃溶液15分钟
2. 步骤二：基因导入：农杆菌介导转化，共培养3天后转移至MS+50mg/L Kan培养基
3. 步骤三：荧光检测：培养14天后用UV灯（365nm）激发观察

五、注意事项

• 避免使用含苯酚的培养基（见《材料科学导论》P78）
• 实验区域需配备紫外线防护设备
• 废弃物按生物危害废物处理